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传统的光学显微镜是什么样子的?
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传统的光学显微镜使用的实际上是场光源,由于光散射,在所观察的视野内,样品上的每一点都同时被照射并成像,入射光照射到整个细胞的一定厚度,位于焦平面外地反射光也可以通过物镜而成像,使图像的信噪比降低,影响了图像的清晰度和分辨率。
此外,传统的额光学金相显微镜也只能对局部作平面成像,而LSCM脱离了这种模式,采用激光束做光源,激光束经照明针孔,经由分光镜反射至物镜,并聚焦于样品上,对标本内焦平面上每一点进行扫描。
然后,激发出得荧光经原来入射光路直接反向回到分光镜,通过探测针孔时先聚焦,聚焦后的光被光电倍增管探测收集,并将信号输送到计算机,在彩色显示器上显示图像。
在这个光路中,只有焦平面啥样的光才能穿过探测针孔,焦平面以外区域射来的光线在探测小孔平面是离焦的,不能通过小孔。因此,非观察点的北京呈黑色,反差增加,成像清晰。由于照明针孔与探测针孔相对于物镜焦平面是共轭的,焦平面上的点不会再探测针孔处成像,即共聚焦。以激光做光源并对样品进行扫描,在此过程中两次聚焦故成为激光共聚焦金相显微镜。
现代的共聚焦显微镜,图像可通过PMT输出产生,也克用数字式电荷耦合器件的相机捕获,并可直接用计算机图像系统进行处理,在高分辨率视频显示器呈现,同时可将所有数据储存在硬盘中。
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